مهندسی پروتئین آنزیم اندوگلوکاناز قارچی از طریق ایجاد جهش هدفمند به منظور بهبود خصوصیات آنزیمی و بیان آن در مخمر
Authors
abstract
زمینه: استفاده از سوخت های فسیلی باعث افزایش بهای آن و کاهش منابع شده است. لذا منابع تجدیدپذیر انرژی و تولید سوخت های زیستی مورد توجه قرار گرفته است. ترکیبات سلولزی از مناسب ترین مواد اولیه برای تولید سوخت های زیستی می باشد. تجزیه سلولز تنها توسط میکروارگانیسم هایی که حاوی آنزیم سلولاز هستند، انجام پذیر است که مهم ترین آن ها قارچ trichoderma reesei می باشد. روش ها: توالی نوکلئوتیدی آنزیم اندوگلوکاناز ii که از کلیدی ترین آنزیم های این کمپلکس و آغازگر حمله به زنجیره سلولزی است، از روی توالی آمینواسیدی آن در قارچt.reesei براساس ترجیح کدونی میزبان یعنی مخمر پیکیاپاستوریس سنتز شد. به منظور تولید آنزیم های بهینه و کاهش زمان تولید و بهای آنزیم از مهندسی پروتئین استفاده می شود و از انواع آن ایجاد جهش هدفمند است که در آن جایگزینی آمینواسیدها صورت می گیرد. در این تحقیق با کمک روش ایجاد جهش هدفمند، دو جهش در ژن آنزیم اندوگلوکاناز ii از طریق pcr ایجاد شد که در آن دو سیستئین آزاد شماره 169 و 393 به ترتیب به آمینواسیدهای والین و هیستیدین تبدیل شدند. سپس این ژن جهش یافته به پلازمید بیانی ppinkα وارد و جهت تکثیر به باکتری اشرشیاکلای و سپس از طریق الکتروپوریشن به مخمر پیکیاپاستوریس منتقل شد. یافته ها: ایجاد دوجهش مذکور بر روی این ژن از طریق تعیین توالی تأیید شد. حضور آنزیم پس از بیان ژن موردنظر در محیط bmmy، با تست دی نیتروسالیسیلیک اسید و ژل sds-page اثبات گردید. نتیجه گیری: با بررسی خصوصیات بیوشیمیایی نشان داده شد که دو جهش ایجادشده به طور همزمان در مقایسه با آنزیم فاقد جهش، باعث کاهش قدرت کاتالیتیکی و پایداری حرارتی و افزایش میل ترکیبی آنزیم و سوبسترا شده است.
similar resources
کلونینگ و بیان آنزیم اندوگلوکاناز نوترکیب قارچی در مخمر و بهبود خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم با استفاده از روش های مهندسی پروتئین
هر روز میزان استفاده از سوخت های فسیلی و بهای آن افزایش و منابع آن کاهش می یابد. به همین علت استفاده از منابع تجدیدپذیر انرژی و تولید سوخت های زیستی(بیواتانول) مورد توجه قرار گرفته است. یکی از مناسب ترین مواد اولیه برای تولید سوخت های زیستی ترکیبات سلولزی می باشد. از مهمترین میکروارگانیسم های تولید کننده ی آنزیم سلولاز قارچ trichoderma reesei می باشد. کمپلکس سلولازی شامل 3 آنزیم اندوگلوکاناز، ا...
افزایش ویژگی‌های عملیاتی آنزیم اندوگلوکاناز از طریق تغییر اسیدآمینه‌ای
Background & Aims : Ethanol produced from plant cellulose is called bioethanol and is recognized as a unique sustainable liquid fuel with powerful economic and environmental effects. In the present study we aimed at integrate a cellulase gene in to yeast genome to have the enzyme secreted out of the cell. Subsequently cellulose is depredated to glucose by the enzyme, and then it is ferment ...
full textایجاد جهش نقطه ای در اسید آمینۀ 263 ژن استرپتوکیناز و کلونینگ و بیان پروتئین جهش یافتۀ حاوی سیستئین
Streptokinase is one of the best known thrombolytic agents with widespread clinical use. However, its use is not risk-free due to its immunogenicity, hemorrhagic complications and relatively short half-life in circulation. Specific PEGylation of cysteine residue is a useful technique for reducing most of these complications. The aim of this study was designing and producing a cysteine containin...
full textبررسی اثر مدت زمان تیمار آنزیمی با اندوگلوکاناز و پالایش در بهبود ویژگی‌های خمیرکاغذ OCC
در این تحقیق تأثیر زمان‌های مختلف تیمار آنزیمی با اندوگلوکاناز و همچنین سطوح مختلف پالایش بر ویژگی‌های کیفی خمیرکاغذ OCC بررسی شد. خمیرکاغذ OCC تهیه شده با آنزیم اندوگلوکاناز با مقدار ثابت u1 (به ازای وزن خشک خمیرکاغذ) در زمان‌های مختلف (5/0، 1، 5/1 و 2 ساعت) در شرایط ثابت فرایندی تیمار شد. نتایج به‌دست آمده نشان داده که تیمار آنزیمی خمیرکاغذ OCC در سطوح مختلف زمانی موجب بهبود ویژگی‌های فیزیکی ...
full textافزایش ویژگی های عملیاتی آنزیم اندوگلوکاناز از طریق تغییر اسیدآمینه ای
پیش زمینه و هدف: اقتصادی ترین نوع اتانول تولیدی بیواتانول می باشد که از مواد گیاهی سلولزی که ارزان قیمت و تجدیدپذیر هستند تهیه می گردد. در طی این روند ژن سلولاز در اختیار مخمر قرار می گیرد و توسط آن به خارج از محیط سلول ترشح می گردد سپس بافت های سلولزی توسط این آنزیم به گلوکز تجزیه می شوند و توسط مخمر تخمیر شده و تولید اتانول می کنند. هدف این مطالعه این است که با استفاده از فن جهش زایی هدفمند ج...
full textMy Resources
Save resource for easier access later
Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاهجلد ۱۷، شماره ۸، صفحات ۴۷۳-۴۸۲
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023